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    ApoE小鼠
    ApoE 基因敲除小鼠是通过同源重组技术制备的具有 3 号外显子纯合缺失的小鼠模型。2017 年斯贝福（北 京）生物技术有限公司从国家啮齿类实验动物种子中心引入培育。
    特征

    ApoE 小鼠模型表现出异常高血脂症状，在 3 月龄时即出现动脉脂肪堆积，17 月龄时小鼠脑内将出现脂瘤性纤维瘤。

    学习记忆能力出现障碍，其与 CHD、高脂血症、脑梗塞、AD 及慢性乙型肝炎等疾病相关。

    用途

    用于研究 ApoE 基因相关疾病，如糖尿病与肥胖研究，心血管研究，动脉粥样硬化研究以及新陈代谢研究。

    成长曲线
    生理生化数据

    品系周龄

    APOE (8 weeks)

    指标

    单位

    雄

    雌

    白细胞计数

    WBC (109/L)

    3.03±0.45

    2.53±0.56

    嗜中性粒细胞计数

    Neu  (109/L)

    0.47±0.11

    0.46±0.14

    淋巴细胞计数

    Lym  (109/L)

    2.46±0.36

    1.99±0.45

    单核细胞计数

    Mon (109/L)

    0.08±0.06

    0.06±0.03

    嗜酸性粒细胞计数

    Eos  (109/L)

    0.02±0.01

    0.02±0.01

    嗜碱性粒细胞计数

    Bas  (109/L)

    0±0

    0±0

    嗜中性粒细胞比例

    Neu (%)

    15.12±2.28

    18.12±3.37

    淋巴细胞比例

    Lym  (%)

    81.18±3.59

    78.44±3.55

    单核细胞比例

    Mon  (%)

    2.66±1.99

    2.18±0.96

    嗜酸性粒细胞比例

    Eos  (%)

    0.86±0.25

    1.14±0.43

    嗜碱性粒细胞比例

    Bas  (%)

    0.18±0.13

    0.12±0.07

    红细胞计数

    RBC (1012/L)

    7.53±0.32

    8.03±0.39

    血红蛋白浓度

    HGB (g/L)

    121.9±5.36

    127±5.48

    红细胞压积

    HCT (%)

    37.11±1.75

    39.51±1.91

    平均红细胞体积

    MCV (fL)

    49.28±0.89

    49.2±0.62

    平均红细胞血红蛋白含量

    MCH (pg)

    16.18±0.16

    15.83±0.14

    平均红细胞血红蛋白浓度

    MCHC (g/L)

    328.8±3.82

    321.9±3.08

    红细胞分布宽度变异系数

    RDW-CV (%)

    12.33±0.71

    11.74±0.58

    红细胞分布宽度标准差

    RDW-SD (fL)

    25.71±1.74

    24.18±1.37

    血小板计数

    PLT (109/L)

    623.9±124.87

    922.5±138.75

    平均血小板体积

    MPV (fL)

    4.9±0.2

    4.65±0.17

    血小板体积分布宽度

    PDW

    15.19±0.12

    15.18±0.11

    血小板压积

    PCT (%)

    0.3±0.06

    0.43±0.05

     

    品系周龄

    APOE (8 weeks)

    指标

    单位

    雄

    雌

    谷丙转氨酶

    ALT

    U/L

    25.97±4.16

    33.53±5.96

    谷草转氨酶

    AST

    U/L

    110.09±30.51

    138.67±32.16

    血清钙

    Ca

    mmol/L

    1.56±0.29

    1.38±0.41

    血清磷

    P

    mmol/L

    11.83±1.18

    8±0.54

    血糖

    Glu-G

    mmol/L

    3.34±0.47

    3.16±0.69

    碱性磷酸酶

    ALP

    U/L

    219.99±31.41

    276.42±39.34

    γ-谷氨酰转肽酶

    γ-GT

    U/L

    -0.18±3.87

    0.76±1.22

    血清总蛋白

    TP

    g/L

    51.4±1.97

    49.12±3.43

    α-淀粉酶

    α-AMY

    U/L

    2966.21±362.29

    2700.54±423.1

    血清甘油三酯

    TG

    mmol/L

    965.51±475.65

    753.89±154.62

    胆固醇

    TC

    mmol/L

    525.54±151.66

    491.61±46.91

    肌酸激酶

    CK

    U/L

    31.06±1.26

    29.13±1.8

    乳酸脱氢酶

    LDH

    U/L

    31.7±6.4

    23.16±2.77

    血清白蛋白

    ALB Ⅱ

    g/L

    11.63±1.66

    8.88±0.93

    脂肪酶

    LIP

    U/L

    2.59±0.35

    2.37±0.17

    尿素氮

    UREA

    mmol/L

    2.43±0.16

    2.19±0.15

    血清镁

    Mg Ⅱ

    mmol/L

    1.48±0.08

    1.38±0.06
    样本信息和目的
    • 样本：
      ApoE小鼠
    • 目的：
      确认ApoE小鼠基因修饰类型
    • 靶基因：
      ApoE apolipoprotein E（apoE）
    • NCBI号：
      11816
    • NCBI链接：
      https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/11816
    方法和结果

    ApoE（apolipoprotein E）是载脂蛋白 E，一种脂肪结合蛋白（载脂蛋白），乳糜微粒和中密度脂蛋白（IDLs）的一部分。ApoE 主要负责运输脂蛋白、脂溶性维生素及胆固醇。ApoE 基因位于 Chr7 上，共有 7 个外显子。

    查询目前所有 ApoE 敲除品系的设计方案和基因型鉴定方案，结果显示目前的方案主要有两种：胚胎干细胞技术和 CRISPR/Cas9 方案，针对两种方案分别设计扩增和测序引物，具体方案如表1：

    ApoE 纯合子靶基因 PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳结果如图 2，结果显示，该动物为 ES 干细胞法制作的 ApoE 突变小鼠。
    注：1、2为方案1扩增结果，3、4为方案2扩增结果，5、6为方案3扩增结果。1、3、5泳道基因组模板为ApoE小鼠，2、4、6泳道为空白对照组，模板为水。

    ApoE 突变小鼠是 Nobuyo Maeda 博士在 The University of North Carolina 开发的，他们使用胚胎干细胞技术产生 ApoE 基因突变的小鼠品系，质粒载体设计方案如图 3：

    使用oIMR0180和oIMR0182 引物对靶基因进行扩增，并进行双向 Sanger 测序。与 NCBI 报道的 ApoE 基因外显子序（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_009696.4）比对，结果显示：oIMR0180 引物正向测序比对失败（结果未显示），oIMR0182 反向测序，ApoE 基因 3 号外显子部分序列可以拟合。ApoE 基因外显子序列上 289 号碱基开始3号外显子剩余序列被Neo基因（新霉素抗性基因 ）所取代（如图 4）。ApoE 基因其他外显子扩增测序结果未显示突变。

    结论

    斯贝福（北京）生物技术有限公司 ApoE 小鼠的基因编辑类型为：ApoE 基因3号外显子部分碱基（125bp）和部分内含子被 Neo 基因取代，其他外显子无突变。

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